لا يُسمح بدخول بعض الأغراض داخل المتحف لضمان سلامة الأعمال الفنية والحفاظ عليها. وتشمل المواد المحظورة، على سبيل المثال لا الحصر:
تتوفّر خدمة غرف المعاطف مجاناً في متاحف الفاتيكان حيث يمكن ترك المتعلقات المحظورة.
*يجب أن تكون الكلاب الإرشادية مربوطة برأس وكمامة، ولن يُسمح بدخول الحيوانات الأليفة العلاجية إلا بشهادة.
تطلب متاحف الفاتيكان من الزوار ارتداء ملابس محتشمة، مع تغطية الكتفين والركبتين. كما أن القمصان بلا أكمام والسراويل القصيرة والتنانير القصيرة والقبعات غير مناسبة.
يجب أن يتجنب الزائرون إظهار الكثير من الجلد؛ فمن المتوقع ارتداء ملابس محتشمة داخل مدينة الفاتيكان والمتاحف. ولا يُسمح بكشف الكتفين أو المنكبين أو الساقين أو الإفراط في إظهار جلد الساقين.
لا يُعتبر إظهار مفاتن الصدر لباساً غير لائق عند دخول متاحف الفاتيكان. يجب ارتداء ملابس محتشمة احتراماً للطبيعة المقدسة للموقع.
يُسمح بارتداء سراويل الجينز في متاحف الفاتيكان شريطة ألا تكون ممزقة أو كاشفة. وينبغي على الزائرين التأكد من ارتداء الجينز مع قميص محتشم يغطي الكتفين والصدر.
يُسمح بحقائب الظهر وحقائب اليد الصغيرة في متاحف الفاتيكان، ولكن قد تخضع للتفتيش الأمني. يجب فحص الحقائب والحقائب الكبيرة في غرفة المعاطف.
لا يُسمح بدخول الأدوات الحادة والأسلحة والمظلات والأوعية الزجاجية والمشروبات الكحولية. للاطلاع على القائمة الكاملة، يُنصح بمراجعة الإرشادات.
يُسمح بالتصوير الفوتوغرافي للاستخدام الشخصي في متاحف الفاتيكان، ولكن التصوير الفوتوغرافي باستخدام الفلاش والحوامل الثلاثية محظور.
يُمنع التصوير الفوتوغرافي وتصوير الفيديو منعاً باتاً داخل كنيسة سيستين للحفاظ على الفن وأجواء الخشوع.
يمكن للزائرين إحضار زجاجات المياه إلى متاحف الفاتيكان؛ ولكن يوصى بأن تكون بلاستيكية وقابلة للغلق لمنع تلف الأعمال الفنية والمباني.
على الرغم من أنك لن تمر عبر الجمارك الرسمية عند دخولك مدينة الفاتيكان، إلا أنه سيتم إجراء فحص أمني مماثل للفحص الأمني في المطارات عند الدخول إلى متاحف الفاتيكان.